Objetivo: evaluar la utilidad de un método simplificado para extracción de ADN, acoplado a un protocolo de PCR anidada, basada en la amplificación de fragmentos del gen de la neumolisina para el diagnóstico de neumonía neumocócica en niños con evidencias clínicas y radiológicas de infección bacteriana.
Muestra Biológica: sangre
Extracción de ADN bacteriano
*LISIS: salina al 0,8 % y se incubó por 2 horas
a 37º C, proteinasa K 0,2 mg y 20 μL de SDS 10 %.
*SEPARACIÓN: 400 μL de Chelex-100 al 5 % y se
calentópor 10 minutos a 95ºC
Gen de la
neumolisina
Especificidad analítica in vitro y la
sensibilidad: (10 UFC/ml)
PCR anida
*DESNAT:: 1 min a 94º C
*HIBRID: 30 s a 55º C
*EXTENC:
1 min a 72º C
Visualización: Electroforesis en gel de agarosa http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0325 75412005000400004&script=sci_abstract
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