ADN Recombinante Neumonía

Neumonía puede ser una causa secundaria de la deficiencia de alfa 1 antitripsina.

En varias investigaciones realizadas se comprobó la existencia de una levadura productora de alfa 1-antitripsina recombinante (rAAT), la misma que desempeña un papel de gran importancia como antielastasa normal pero se encuentra asociada a una filtración renal alta, el empleo de esta enzima recombinante evita la administración intravenosa crónica. rAAT se administró directamente en los pulmones en forma de aerosol, después de la administración las defensas contra la elastasa de los neutrófilos aumentaron considerablemente y no se observaron efectos adversos.

PspA, una proteína de superficie de Streptococcus pneumoniae 

Corresponde a un factor de virulencia, inmunogénica y común a todos los serotipos la PspA contiene epitopes conservados de manera tal que la inmunización genera protección contra neumococos pertenecientes a diversos tipos capsulares y con distintas PspA. Esta información podría ser un valioso aporte para la formulación de una vacuna efectiva utilizando PspA recombinante como inmunógeno.Empleando la tecnología del DNA recombinante permite la producción in vivo de bioconjugados en E. coli. La plataforma permite el diseño y producción controlada de glicoproteínas con una estructura de polisacárido a medida, que se dirigirá a los patógenos bacterianos que no pueden ser tratados con procesos químicos existentes.

 

Fuente: 

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC329798/pdf/jcinvest00485-0305.pdf

http://www.scielo.org.co/pdf/rccp/v19n3/v19n3a09.pdf

http://www.genengnews.com/gen-articles/developing-next-gen-conjugate-vaccines/4042/

ADN Recombinante en la Naturaleza

ADN recombinante constituyen moléculas que se construyen fuera de las células vivientes juntando segmentos de ADN sintético o natural

 

Características:

·  Pueden replicarse en una célula viviente, hoy en día es posible crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no tengan homología y también pueden proceder de diversos organismos.

·  Es posible aislar las secuencias de ADN de un organismo y pasarlo al otro con una adecuada dosis de enzimas de restriccion y vectores moleculares

Ejemplos:

1.Reproducción sexual el ADN de los progenitores se combina de forma natural manifestándose como una mezcla de características en los descendientes.

2.Recombinación en la reproducción viral

3.Recombinación por transformación bacteriana

4.Cambio de clase de inmunoglobulinas  Conversión génica

http://es.scribd.com/doc/70708591/Recombinacion-genetica

http://www.ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html

Técnicas de hibridación

MICROARRAY

Constituyen pequeños soportes sólidos, donde secuencias de miles de genes diferentes están inmovilizados o fijos. Los soportes son portaobjetos de vidrio, pero también puede ser chips de silicio o membranas de nylon. El ADN se imprime o realmente es sintetizado directamente sobre el soporte.

Fig.1 Microarray

¿Por qué utilizarlos en la Neumonía

En relación a la Neumonía, la técnica del microrray constituye una herramienta de mucha importancia y utilidad ya que se la puede aplicar para determinar la resistencia bacteriana a cierto tipo de antibióticos, mostrando una correlación entre la resistencia fenotípica y la presencia de genes de resistencia.

Según varios estudios realizados se puede confirmar que la técnica de hibridación de microarrays constituye una alternativa de gran valor en relacion con técnicas de tipificacion convencionales, proporcionando características adicionales que son complementarias a la caracterización de las cepas.

ref: 

http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10096-011-1234-x

http://escuela.med.puc.cl/publ/boletin/neumonia/Neumonia04.html

http://microarraydna.blogspot.com/2011/03/citogenetica-molecular-microarray.html

PCR

Evaluación de una PCR anidada en pacientes pediátricos para diagnóstico de neumonía neumocócica adquirida en la comunidad

Objetivo: evaluar la utilidad de un método simplificado para extracción de ADN, acoplado a un protocolo de PCR anidada, basada en la amplificación de fragmentos del gen de la neumolisina para el diagnóstico de neumonía neumocócica en niños con evidencias clínicas y radiológicas de infección bacteriana.

Muestra Biológica: sangre

Extracción de ADN bacteriano

*LISIS: salina al 0,8 % y se incubó por 2 horas a 37º C, proteinasa K 0,2 mg y 20 μL de SDS 10 %.

*SEPARACIÓN: 400 μL de Chelex-100 al 5 % y se calentópor 10 minutos a 95ºC

Gen de la neumolisina

Especificidad analítica in vitro y la sensibilidad: (10 UFC/ml)

PCR anida

*DESNAT:: 1 min a 94º C

*HIBRID: 30 s a 55º C

*EXTENC: 1 min a 72º C

Visualización: Electroforesis en gel de agarosa 
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0325 75412005000400004&script=sci_abstract