Terapia génica

Tiene como fundamento la inserción de genes funcionales en las células de un individuo y de los tejidos como tratamiento de una enfermedad.

 

Los avances científicos continúan evolucionando hacia la terapia genética, la medicina convencional, sin embargo es importante conocer que la técnica aún se encuentra en desarrollo, razón  por la cual su aplicación se lleva principalmente a cabo dentro de ensayos clínicos controlados, y para el tratamiento de enfermedades severas o bien de tipo hereditario o adquirido.

La mayoría de los estudios de terapia genética están dirigidos a cáncer y enfermedades hereditarias vinculadas a un defecto genético.

Entre los criterios para elegir este tipo de terapia se encuentran:

   -Enfermedad letal sin tratamiento.

   -La causa sea un único gen que esté ya clonado.

   -La regulación del gen sea precisa y conocida.

Para hablar de la terapia génica y su aplicación en la neumonía es necesario conocer que  el interferón conocido como gamma (IFN-γ) es una de las moléculas fundamentales en  la defensa ante multitud de patógenos respiratorios, además saber que los adenovirus producen una reacción de secreción local de INF-γ.

Con estos datos, el presente artículo discute que dosis diferentes de adenovirus transgénicos portadores del gen de TNF que provoca la liberación de INF-γ por parte del organismo tienen distintos resultados terapéuticos en el tratamiento de enfermedades respiratorias como neumonía siempre y cuando sean insertados con un control específico.

es.wikipedia.org/wiki/

www.news-medical.net/health/What-is-Gene-Therapy-(Spanish).aspx

http://www.elsevier.es/sites/default/files/elsevier/pdf/64/64v27n03a13046207pdf001.pdf

Ejemplo de trangénico utilizado en la neumonía

Investigadores españoles crean un ratón transgénico para estudiar la neumonía

Un equipo de científicos españoles han desarrollado ratones transgénicos que permitirán estudiar los efectos de virus como el de la neumonía atípica o SRAS (Síndrome Respiratorio Agudo Severo) y experimentar nuevas vacunas.

Un ratón transgénico es un animal al que se le ha modificado su ADN y por tanto su información genética. Frecuentemente estas modificaciones consisten en la introducción o en la eliminación de un gen (fragmento de ADN que codifica la información para producir una proteína). Mientras que insertando un gen de otro organismo podemos obtener ratones que producen proteínas que antes no producían, eliminando un gen saber qué función desempeñaba la proteína que codificaba.

 

 

CONCLUSIÓN:  

Ventajas:  

-Ha podido explicar que los ratones transgénicos se han hecho susceptibles a un coronavirus humano productor del resfriado común en personas con un sistema inmune normal y de neumonías en personas inmunodeprimidas. 

-Este modelo animal también permite evaluar la eficacia y bioseguridad de un vector para vacunas y terapia génica.

Desventajas: La introducción de una nueva información genética (el transgén) dentro del genoma de un organismo puede presentar algunos problemas en relación a dónde y cuándo expresar el transgén, tal como se indica a continuación:

-Integración múltiple (en tándem o no)
-Lugar de integración indeterminado (efecto de posición)
-Metilación y falta de expresión

Ref: http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0034-74932004000200010&script=sci_arttext

ADN Recombinante Neumonía

Neumonía puede ser una causa secundaria de la deficiencia de alfa 1 antitripsina.

En varias investigaciones realizadas se comprobó la existencia de una levadura productora de alfa 1-antitripsina recombinante (rAAT), la misma que desempeña un papel de gran importancia como antielastasa normal pero se encuentra asociada a una filtración renal alta, el empleo de esta enzima recombinante evita la administración intravenosa crónica. rAAT se administró directamente en los pulmones en forma de aerosol, después de la administración las defensas contra la elastasa de los neutrófilos aumentaron considerablemente y no se observaron efectos adversos.

PspA, una proteína de superficie de Streptococcus pneumoniae 

Corresponde a un factor de virulencia, inmunogénica y común a todos los serotipos la PspA contiene epitopes conservados de manera tal que la inmunización genera protección contra neumococos pertenecientes a diversos tipos capsulares y con distintas PspA. Esta información podría ser un valioso aporte para la formulación de una vacuna efectiva utilizando PspA recombinante como inmunógeno.Empleando la tecnología del DNA recombinante permite la producción in vivo de bioconjugados en E. coli. La plataforma permite el diseño y producción controlada de glicoproteínas con una estructura de polisacárido a medida, que se dirigirá a los patógenos bacterianos que no pueden ser tratados con procesos químicos existentes.

 

Fuente: 

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC329798/pdf/jcinvest00485-0305.pdf

http://www.scielo.org.co/pdf/rccp/v19n3/v19n3a09.pdf

http://www.genengnews.com/gen-articles/developing-next-gen-conjugate-vaccines/4042/

ADN Recombinante en la Naturaleza

ADN recombinante constituyen moléculas que se construyen fuera de las células vivientes juntando segmentos de ADN sintético o natural

 

Características:

·  Pueden replicarse en una célula viviente, hoy en día es posible crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no tengan homología y también pueden proceder de diversos organismos.

·  Es posible aislar las secuencias de ADN de un organismo y pasarlo al otro con una adecuada dosis de enzimas de restriccion y vectores moleculares

Ejemplos:

1.Reproducción sexual el ADN de los progenitores se combina de forma natural manifestándose como una mezcla de características en los descendientes.

2.Recombinación en la reproducción viral

3.Recombinación por transformación bacteriana

4.Cambio de clase de inmunoglobulinas  Conversión génica

http://es.scribd.com/doc/70708591/Recombinacion-genetica

http://www.ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html

Técnicas de hibridación

MICROARRAY

Constituyen pequeños soportes sólidos, donde secuencias de miles de genes diferentes están inmovilizados o fijos. Los soportes son portaobjetos de vidrio, pero también puede ser chips de silicio o membranas de nylon. El ADN se imprime o realmente es sintetizado directamente sobre el soporte.

Fig.1 Microarray

¿Por qué utilizarlos en la Neumonía

En relación a la Neumonía, la técnica del microrray constituye una herramienta de mucha importancia y utilidad ya que se la puede aplicar para determinar la resistencia bacteriana a cierto tipo de antibióticos, mostrando una correlación entre la resistencia fenotípica y la presencia de genes de resistencia.

Según varios estudios realizados se puede confirmar que la técnica de hibridación de microarrays constituye una alternativa de gran valor en relacion con técnicas de tipificacion convencionales, proporcionando características adicionales que son complementarias a la caracterización de las cepas.

ref: 

http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10096-011-1234-x

http://escuela.med.puc.cl/publ/boletin/neumonia/Neumonia04.html

http://microarraydna.blogspot.com/2011/03/citogenetica-molecular-microarray.html

PCR

Evaluación de una PCR anidada en pacientes pediátricos para diagnóstico de neumonía neumocócica adquirida en la comunidad

Objetivo: evaluar la utilidad de un método simplificado para extracción de ADN, acoplado a un protocolo de PCR anidada, basada en la amplificación de fragmentos del gen de la neumolisina para el diagnóstico de neumonía neumocócica en niños con evidencias clínicas y radiológicas de infección bacteriana.

Muestra Biológica: sangre

Extracción de ADN bacteriano

*LISIS: salina al 0,8 % y se incubó por 2 horas a 37º C, proteinasa K 0,2 mg y 20 μL de SDS 10 %.

*SEPARACIÓN: 400 μL de Chelex-100 al 5 % y se calentópor 10 minutos a 95ºC

Gen de la neumolisina

Especificidad analítica in vitro y la sensibilidad: (10 UFC/ml)

PCR anida

*DESNAT:: 1 min a 94º C

*HIBRID: 30 s a 55º C

*EXTENC: 1 min a 72º C

Visualización: Electroforesis en gel de agarosa 
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0325 75412005000400004&script=sci_abstract

Extracción de adn

Perfiles genéticos y patrones de resistencia en aislamiento de M. tuberculosis de pacientes con tuberculosis pulmonar. Lima Sur, Perú.

Objetivo:

Conocer los perfiles genéticos de M. Tuberculosis y determinar el patrón de resistencia a drogas en uan población de sujetos infectados provenientes del Sur de Lima mediante el marcador genético IS6110 (RFLP-IS6110).

-Extracción de ADN genómico.

-Restricción enzimática y transferencia de ácidos nucleicos.

-Hibridación con la sonda 245pb-IS6110 y obtención de los perfiles genéticos RFLP-IS6110.

Resultados:

De 118 aislamientos de M. Tuberculosis se identificaron 97 perfiles genéticos variando entre 2 y 15 bandas por perfil. El 29.7 de los aislamientos dio origen a 14 grupos o clusters genéticos mientras que el resto mostró patrones variables de bandas. De otro lado, los perfiles de resistencia revelaron cerca de 33% de los sujetos participantes nunca tratados presentaron resistencia a drogas y 58% de los tratados con anterioridad. La multidrogoresistencia fue de 8.24% y 36% en los que nunca y anteriormente tratados respectivamente. 

Conclusiones: 

El análisis revela la existencia de grupos genéticos con relación epidemiológica o clonal sin evidencia de transmisión de cepas resistentes a múltiples drogas. 

Sugerencia:continuar con este tipo de investigaciones de epidemiología molecular, que nos permita caracterizar la diversidad clonal de las cepas provenientes de diferentes zonas, así como definir grupos de perfiles genéticos asociados a transmisión.